CCR7 重组慢病毒的构建及其表达对结肠癌细胞侵袭的影
2017-12-18 9:50:57  作者:林汉利 陈小欢 王晓玲   来源:  阅读:327次

 

科研课题
      2017年 第23卷 第23期

  【摘要】 目的 构建含有 CCR7 的重组基因工程慢病毒,并转导结肠癌 HT29 细胞,高效表达CCR7 蛋白,并研究趋化因子受体 CCR7 的表达在人结肠癌 HT29 细胞体外转移中的作用。方法 提取HT29 细胞的 RNA,RT-PCR 扩增 CCR7 基因,克隆至慢病毒载体 pLVX-acGFP-N1,形成重组慢病毒载体 pLVX-acGFP-CCR7,转染 293T 细胞,得到慢病毒 LV-CCR7,转导慢病毒 LV-CCR7 至 HT29 细胞,经 puromycin 筛选 10 d。提取细胞的 RNA,QPCR 检测 CCR7 基因相对表达量的变化。划痕和 Transwell小室实验分别检测 HT29 细胞和 CCR7 过表达细胞迁移和侵袭能力的差异。Western blotting 检测 CCR7 蛋白和 MMP-9 蛋白相对表达量。结果 酶切和测序都表明 CCR7 克隆至慢病毒载体,慢病毒成功转导至HT29 细胞,QPCR 检测 HT29 细胞中 CCR7 表达升高了 15.4 倍,Western blotting 检测 CCR7 蛋白表达上升了 4.7 倍。CCR7 过表达的 HT29 细胞向划痕处爬行的速度明显快于 HT29 细胞对照组;过表达 CCR7 的HT29 细胞透过膜的数量高于普通 HT29 细胞。过表达 CCR7 的 HT29 细胞与细胞侵袭转移相关的基质金属蛋白酶表达量显著高于普通 HT29 细胞。结论 利用含有 CCR7 的重组基因工程慢病毒成功构建了高效表达 CCR7 蛋白的结肠癌 HT29 细胞。研究发现高效表达的 CCR7 能促进结肠癌 HT29 细胞的体外迁移侵袭能力,增强了基质金属蛋白酶的表达。
  【关键词】 CCR7 基因;慢病毒;结肠癌;细胞迁移;细胞侵袭;

  DOI:10.3760/cma.j.issn.1007-1245.2017.23.005
  基金项目:深圳市科创委科技创新项目(JCY20140416094330192);龙岗区科技发展资金项目
(YLWS20150513163509153)
  518033 深圳,中山大学附属第八医院消化内科(林汉利、陈小欢、王晓玲);518172 
  深圳市耳鼻咽喉研究所 深圳市龙岗区耳鼻咽喉医院(曾浩涛)
  通信作者:曾浩涛,E-mail:zhtdbyyyq@126.com

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