PML-RARα融合基因相关蛋白原核表达载体的构建、表达
2017-7-31 18:50:35  作者:杜琴 蔡嘉镜 蒋春萍   来源:  阅读:302次

 

科研课题
      2017年 第23卷 第13期 

【摘要】 目的 构建PML-RARα融合基因相关重组表达质粒,在大肠埃希菌中表达可溶性蛋白并 进行纯化。方法 利用聚合酶链反应 (Polymerase Chain Reaction,PCR) 以 PML-RARα 全长质粒为模板分 别扩增出长度均为 1 200 bp 的 PML 和 RARα 序列,并将它们分别插入 PET32a(+) 质粒中,构建重组表达 质粒,化学法转化大肠埃希菌DH5α进行克隆, 菌落PCR筛选阳性转化子,双酶切和测序鉴定重组质粒 的正确性。正确重组的表达质粒分别命名为 PML-Flag-PET32a(+) 和 Flag-RARα-PET32a(+)。将正确重组 的表达质粒转化感受态大肠埃希菌BL21(DE3),经异丙基β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,利用表达蛋白 的组氨酸“标签”(His-tag) 进行 Ni2+- 树脂柱亲和层析纯化,SDS-PAGE 和 Western blotting 鉴定纯化蛋白质。 结果 PCR扩增获得目的基因,重组表达质粒经EcoRI/HindIII双酶切和测序鉴定证明构建正确。转化感受 态 BL21(DE3) 并经诱导后得到高效表达,SDS-PAGE 和 Western blotting 显示纯化蛋白为目的蛋白。结论 成功构建重组表达质粒,并经诱导表达后可纯化出目的蛋白,为进一步的抗体制备等实验奠定了基础。
【关键词】 PML-RARα融合基因;重组质粒;蛋白表达;蛋白纯化;急性早幼粒细胞白血病;抗 体制备

DOI:10.3760/cma.j.issn.1007-1245.2017.13.004
基金项目:玉林市科学技术局科学攻关课题(玉市科计20170101)537000 玉林市第二人民医院
637000 南充,川北医学院附属医院检验科(杜琴、张国元、王东生);637000 南充,川北医学院医学检验系(杜琴、蔡嘉静、蒋春萍),转化医学研究中心(杜琴、蔡嘉静、徐磊、王东生)
通信作者:王东生,E-mail: 13990820268@163.com 

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